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四川大学成功建立人新基因PCIA1细胞株

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来源: 作者: 2019-05-17 02:05:34

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近日,四川大学华西医院、生物治疗国家重点实验室和肿瘤中心的王瑞、邓洪新等研究人员,以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,采用RT-PCR扩增转染技术,成功建立一人新基因PCIA1细胞株。该细胞株被命名为PCIA1基因,基因cDNA全长为1086bp,编码一个102个氨基酸的蛋白质,其在基因库中的序列号为AY563006。

据介绍,至2003年底人类基因组计划已完成,但大多数基因功能未知。因此,克隆新基因并阐明其功能及基因间的相互作用,是目前研究人员面临的新课题和新挑战。

近年来,王瑞等研究人员在探讨人的新基因中,以HUVEC总RNA为模板,通过引物设计、RT-PCR扩增、重组真核表达载体构建、HeLa细胞基因转染及G418抗性基因筛选等一系列技术处理后,从而成功地构建出一转染稳定的“人新基因PCIA1细胞株”。

该细胞株经RT-PCR检测和重组质粒酶切鉴定显示:HUVEC总RNA扩增物电泳,可见约309bp处有一特异性扩增条带,与预期健康杀手——冠心病我该拿你怎么办?
扩增片段大小相符;重组pcDNA-PCIA1经测序证实,插入片段为PCIA1扩增片断,且插入方向正确,PCIA1基因已稳定转染到HeLa细胞中,并表达PCIA1蛋白。同时,免疫印迹分析还发现,PCIA1基因转染的HeLa细胞的裂解物可见到特异性带,其亮度大于空质粒转染及未转染的HeLa细胞。提示真核表达重组质粒pcDNA-PCIA1构建成功,其PCIA1新基因转染稳定,表达广泛,特异性强。

研究人员认为,PCIA1基因位于人的染色体19p13.2-p13.1之间,是一个单拷贝基因。在不同的物种中5款牛仔唯美搭配引领春季时尚
,它的编码区序列非常守旧,其结构特征十分独特,它没有跨膜区,也没有信号肽序列,不是膜蛋白,也不是分泌蛋白,可能位于细胞核内。同时,免疫组织化学实验发现,PCIA1基因所表达的蛋白主要在核内,推断其可能是一个核内的因子。由于该基因散布广泛,在基因进化进程中非常保守,因此可能是一个对细胞生长非常重要的基因。PCIA1基因的成功建立,不但为深入研究基因生物学功能奠定了基础,也拓展了肿瘤的基因治疗前景。

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